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嘔吐毒素親和柱的檢測過程解析

更新時間:2018-10-27      點擊次數:1232
嘔吐毒素親和柱檢測原理:測定的基礎是抗原抗體反應。DON單克隆抗體連接在柱內凝膠上,樣品中的DON經過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢的通過DON嘔吐毒素親和柱。在嘔吐毒素親和柱內,毒素與抗體結合,之后洗滌嘔吐毒素親和柱除去沒有被結合的雜質,用甲醇洗脫DON。
 
嘔吐毒素親和柱的檢測過程解析:
一:樣品前處理
稱取10g 面粉加入100ml 水,高速均質1 分鐘,用玻璃纖維濾紙過濾至澄清,取2ml 濾液作為待上樣液。
 
二:檢測前的準備和注意事項
1. 將所需的免疫親和柱在使用前回溫至室溫(20-25℃)。
2. 免疫親和柱的上下端有塑料塞子,在使用時可以取下。
3. 在使用的過程中避免免疫親和柱的干燥。例外情況為洗脫前短暫的排空和洗脫后的*排空
4. 過高的壓力或真空提取設備產生的負壓會壓緊凝膠而導致回收率降低。
 
三:嘔吐毒素親和柱操作過程
• 將5ml 或10ml 注射器連接于免疫親和柱上端(通過小柱連接件)。
• 2ml 處理好的樣品液以1-2 滴/ 秒的速度通過親合柱,棄掉流出的液體。
• 以5ml 水淋洗柱子一次,棄掉流出的液體。
• 利用真空設備壓入空氣(約10 秒),確保排除所有的液體。
• 用1ml 甲醇緩慢洗脫(流速約為2-3 秒每滴),殘留的洗脫液使用空氣壓出或真空抽出(30 秒)并將洗脫液收集于干凈的收集管中。
• 將洗脫液吹干后加入1ml 流動相復溶,用于液相色譜檢測。