薄層色譜TLC是將吸附劑、載體或其他活性物質均勻涂鋪在平面板（如玻璃板、塑料片、金屬片等）上，形成薄層（常用厚度為0.25毫米左右）后，在此薄層上進行層析分離的分析方法。
分析程序 將樣品溶液用毛細管點在薄層板的一端，置密閉槽中，加入適宜溶劑為流動相。由于毛細管作用，溶劑被吸上，沿板移動，并帶動樣品中各組分向前移動，這個過程稱為展開。由于各組分性質不同，移動距離不同，展開一定距離后，即得互相分離的組分斑點。可用適當方法使各組分在板上顯示其位置，如組分本身有顏色，即可直接觀察，否則可噴顯色試劑或在紫外燈下觀察熒光等辦法確定斑點位置。
薄層色譜TLC操作
⑴制板（以硅膠板為例）
選擇合適的玻璃板（經常使用顯微鏡上的載玻片），依次用水和乙醇洗凈，晾干。取適量薄層色譜用的硅膠，加適量蒸餾水調成糊。調制時慢慢攪拌，勿使產生氣泡。將糊倒在玻璃板上，搖動攤平，晾干。使用前放入烘箱內，在105-115oC左右烘干40-50分鐘。冷卻后使用。
⑵點樣
將試樣用zui少量展開劑溶解，用毛細管蘸取試樣溶液，在薄層板上點樣。在樣點上輕輕畫出一條平行于玻璃板底邊的細線。薄層色譜板載樣量有限，勿使點樣量過多。
⑶展開
吹干樣點，豎直放入盛有展開劑的有蓋展開瓶中。展開劑要接觸到吸附劑下沿，但切勿接觸到樣點。蓋上蓋子，展開。待展開劑上行到一定高度（由試驗確定適當的展開高度），取出薄層板，再畫出展開劑的前沿線。
⑷顯色，計算Rf值
揮發干展開劑，選擇合適的顯色方法顯色。量出展開劑和各組分的移動距離，計算各組分的相對移動值。
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